必知干貨——酶標(biāo)板的選購要注意哪些方面
 

　　在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時(shí)間等條件起著關(guān)鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯表面對(duì)抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附也起著重要作用。

　　酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng)，也可以用來測(cè)蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板，一般不用做細(xì)胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè)，需要更高的要求和特定的酶標(biāo)工作液。

　　一：根據(jù)酶標(biāo)板底部的不同，可以分為平底、U型底、V型底

　　平底的折射率低，適于在酶標(biāo)儀檢測(cè);U型底的酶標(biāo)板折射率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作，可以不用放在酶標(biāo)儀上，直接通過目測(cè)觀察顏色變化情況，從而判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。V底的酶標(biāo)板可以精確的吸取樣品。

　　二：根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同，分為高結(jié)合力、中結(jié)合力和氨基化

　　高結(jié)合力：表面經(jīng)處理后，其蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng)，可達(dá)300~400ngIgG/cm2，主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性，并可相對(duì)減少包被蛋白的濃度和用量，不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)?？乖蚩贵w包被后，以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位，需使用蛋白作為封閉劑。

　　中結(jié)合力：經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結(jié)合，適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體，其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性，適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體，可降低潛在的非特異性交叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

　　氨基化：經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基，其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值，其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性，一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外，其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性，使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。

　　三：根據(jù)顏色分為透明、黑色、白色

　　透明的是常用的，用于最一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)。相對(duì)于透明的的板子，還有用于發(fā)光檢測(cè)用的不透明的板子，一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板自身會(huì)有光吸收，所以它的信號(hào)相對(duì)于白色的板子要低很多，因此一般用于檢測(cè)較強(qiáng)的光，如熒光檢測(cè)。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測(cè)，常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標(biāo)板還可以消弱非特異反應(yīng)帶來的問題。有些客戶會(huì)問，用一般的酶標(biāo)板可不可以進(jìn)行發(fā)光檢測(cè)，回答是不可以的，因?yàn)橐话銖幕瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性的，也就是說各個(gè)方向上同等發(fā)射出來的。如果用透明的板子，光不僅會(huì)從垂直方向發(fā)散，還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會(huì)通過各個(gè)孔之間的間隙和孔壁。這樣的話，光較強(qiáng)時(shí)相鄰孔之間的影響就會(huì)很大，因此不能用透明的酶標(biāo)板來進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)。

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